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      上海通蔚生物細胞系的操作方法及注意事項
      發布時間:2022-11-16   點擊次數:132次

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      一、實驗前準備

      1、清理實驗臺及儀器

      2、開啟冷凍切片機并將冷凍切片機預降至所需溫度(- 15~-20 ℃*)

      3、準備好處理好的載玻片、刀片、膠水以及藥品


      二、取材

      解剖之后迅速取出所需的新鮮組織,用干紗布或濾紙擦干后不需固定直接取材(24×24×2mm*),以防形成冰晶造成切片中形成形狀不一的空泡,使細胞內結構移位。


      注:取材中目的標本既要明確也要確保其結構的完整性,應避免不必要的脂肪及壞死組織附著;要盡量剔除毛發、硬骨或鈣化物;保乳手術切緣由于脂肪組織較多,取材厚度最好不要超過 3mm,厚者冰凍費時,大者難以切完整。甲狀腺及淋巴結組織要帶全組織被膜并除去多余的脂肪組織。


      三、冷凍切片

      1、取出組織支承器,放平擺好組織,周邊滴上包埋劑,速放于冷凍臺上冰凍,細胞系用吸熱器壓住組織,至包埋劑與組織凍結成白色冰體即可切片(1~3分種)。

      2、將冷凍好的組織塊,夾緊于切片機持承器上,啟動粗進退鍵,轉動旋鈕,將組織修平。

      3、調好欲切的厚度,根據不同的組織而定,原則上是細胞密集的薄切,纖維多細胞稀的可稍為厚切,一般在5 ~10μm間。

      4、調好防卷板。制作冰凍切片,關鍵在于防卷板的調節上,這就要求操作者要細心,準確地將其調較好,調校至適當的位置。切片時,以切出完整、平滑的切片為準。切好的組織在干凈的玻片上黏附時順著一個方向稍微用力輕輕一帶 ,可避免組織攤片過程中皺折 ,保證組織結構的完整及切片的美觀。

      注:①包埋劑的選用:包埋劑是對冷凍切片質量一重要影響因素,包埋劑用量要適宜,過多或過少都會影響標本冷凍質量。常用的有三種包埋劑OCT劑、B超藕合劑以及普通膠水。B超藕合劑適用于細胞豐富質地較嫩的組織,普通膠水或 OCT劑適用于纖維豐富質地偏硬組織。(OCT包埋劑驟冷時固化,其冷凍速度和軟硬韌度與組織相近,其還具有水溶性,不影響染色等優點。)

      ②組織塊過?。合葘⑸倭磕z擠在托架上預先放在冰凍機中冷凍,約30秒鐘左右待膠凝固時將小組織放上,組織周圍再加一些膠,再次置于冷凍機中冷凍,這樣組織被墊高,就能快速切出高質量的切片。

      ③冷凍箱及冷凍頭的溫度高低,要根據不同的組織而定。溫度過低會導致組織塊過硬,切片碎裂,出現梯田狀薄厚不均或空洞;反之,溫度過高,組織塊硬度不夠 ,切片不易成形或成皺褶。數據圖1供參考。

      ④當切片時,如果發現冰凍過度時,可將冰凍的組織連同支承器取出來,在室溫停留片刻,再行切片,或者用口中哈氣,或者用大拇指按壓組織塊,以此來軟化組織,再行切片。另者,調高冰凍點。

      ⑤用于附貼切片的載玻片,不能存放于冷凍處,于室溫存放即可。因為當附貼切片時,從室溫中取出的載玻片與冷凍箱中的切片有一種溫度差,當溫度較高的載玻片附貼上溫度較低的切片時,由于兩種物質間溫度的差別,當它們碰撞在一起時,分子彼此間發生轉移而產生了一種吸附力,使切片與載玻片牢固地附貼在一起。如果使用冷藏的載玻片來附貼切片,由于溫度相同,沒有發生上述的現象。


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