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      人ELISA試劑盒樣本的步驟
      發布時間:2015-05-04   點擊次數:1466次

          因此可以說基因工程就是分子生物學的工程應用。人ELISA試劑盒現在基因工程所展現出的強大生命力和巨大的經濟發展潛力完全得益于分子生物學的迅猛發展,而且有證據表明,基因工程的進一步發展仍然要依賴于分子生物學研究的發展。

          顧名思義,分子生物學就是研究生物大分子之間相互關系和作用的一門學科,而生物大分子主要是指基因和蛋白質兩大類;分子生物學以遺傳學、生物化學、細胞生物學等學科為基礎。從分子水平上對生物體的多種生命現象進行研究;分子生物學在理論和實踐中的發展也為基因工程的出現和發展打下了良好的基礎,人ELISA試劑盒是以免疫學反應為基礎,將抗原、牽9體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應物,從而保證試驗結果的特異性與穩定性。
      人ELISA試劑盒中zui常用的酶為HRP和ALP。
      (1)HRP:是一種糖蛋白,含糖量約18%,分子量為44kD,在蔬菜作物辣根中含量很高。HRP是一種復合酶,由主酶(酶蛋白)和輔基(亞鐵血紅素) 結合形成一種卟啉蛋白質。主酶為五色糖蛋白,在275nm波長處有zui高吸收峰;輔基是深棕色的含鐵卟啉環,是酶的活性基團,在403nm波長處有zui高吸收峰。HRP的純度用純度值(reinhartzahl,RZ)表示,RZ=A403nm/A275nm,即403nm的吸光度與280nm的吸光度之比,高純度HRP的RZ值應≥3.0。HRP質量的另一重要指標是酶活力,以單位(unit,U)表示。用于標記的HRP比活性應≥250U/mg。HRP的作用底物為H202,催化下列反應;
      在現在的ELISA商品試劑盒中,必然有使用微量加樣器加入。

          注意的關鍵點是:加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產生氣泡。加樣太快,無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區,易導致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產生污染。人ELISA試劑盒出現氣泡則反應液界面有差異。所以,有時候一份標本用相同的試劑盒這次測定為陽性,下次測定為陰性,往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。

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