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      人ELISA試劑盒的雙位點一步法的應用
      發布時間:2015-05-05   點擊次數:3227次

      操作步驟

      1、將1個McAb與固相載體連接,形成固相McAb。人ELISA試劑盒洗滌除去未結合物。

      2、同時加入待檢標本和酶標McAb,溫育,是待檢抗原和固相McAb及酶標McAb反應形成雙抗體夾心復合物。洗滌除去未結合物。

      3、加底物顯色。

      適用于雙抗體夾心法的人ELISA試劑盒,有些也可用雙位點一步法檢測。如HBsAg同樣可用此法進行檢測,其原理為:將純化的抗HBs吸附于固相載體表面,加入待檢血清(或血漿),同時加入辣根過氧化物酶標記的另一個抗HBs(酶結合物),如血清或血漿中含有HBsAg,則通過溫育形成固相McAb-HBsAg-酶標McAb復合物,加入底物,通過顯色反應進行測定。若血清或血漿中不含HBsAg,通過洗滌除去未結合物,

      加底物后就不顯色。

      1.吸取液體時速度不易太快,以免產生氣泡,吸取的量不夠準確。
      2.液體全部加入酶標孔后,將酶標板放在桌子上平行輕輕搖晃30s,使液體充分混合均勻,也使其得到充分的反應。
      3.孵育時要使蓋板膜封好酶標板,防止水分蒸發,以防曲線不成線性。
      4.由于底物顯色劑對光及其敏感,因此要避光保存。
      5.手工洗板時每次加入洗滌液后。應靜置15~30s,不要將一個酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中,防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。
      6.吸取液體時要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸,減少誤差。
      7.檢測吸光度前應將酶標儀打開,將其預熱30min以上。
      8.底物為TMB,避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性,應盡量避免接觸皮膚。
      9.要確保微量加樣器的準確性,可以使用蒸餾水和電子天平進行確定(由于蒸餾水不含雜質,人ELISA試劑盒溫度環境為20%左右時,lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加樣器都應該將其zui高量程和zui低量程進行確定。
      10.要盡量做雙孔實驗,這樣才既能保證數據的準確性,又能反映出試劑盒的精密度。
      11.對樣本的結果有疑問時需要使用其他檢測方法進行驗證。

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